接着，武昭仪的母亲杨氏几次拜访长孙无忌的府第，请求长孙无忌同意废王立武，但是结果都一样，长孙无忌仍然拒绝 。永徽六年，唐高宗终于不顾大臣们的冒死极谏，诏废王皇后和萧淑妃，册立武则天为皇后 。因谏争，褚遂良等人被远贬蛮荒，武则天最恨长孙无忌，在她授意下，由许敬宗费尽心机，把长孙无忌编织进一桩朋党案，进行恶毒陷害 。
唐高宗先是吃惊不信，继而伤心怀疑，命许敬宗再察，然后面对许敬宗足未出户编造的谋反供词，哭泣道：“舅若果尔，朕决不忍杀之，天下将谓朕何，后世将谓朕何!”许敬宗举汉文帝杀舅父薄昭，天下以为明主之例宽慰高宗，又引“当断不断，反受其乱”的古训，催促其下决心 。
唐高宗性格懦弱，竟然不与长孙无忌对质，就下诏削去了长孙无忌的太尉官职和封邑，流徙黔州 。长孙无忌的儿子及宗族全被株连，或流放或被杀 。三个月后，高宗又令许敬宗等人复核此案，许敬宗直接派人前往逼迫长孙无忌自杀，一代名相就此陨落 。
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在唐高宗李治即位后，长孙无忌虽然一开始备受重用，却最终被逼自杀，究其原因，主要分为以下几点 。一方面，长孙无忌不懂进退，在大权在握的时候不愿急流勇退，这显然让唐高宗李治逐渐心生不满 。在中国古代历史上，皇帝和权臣之间的关系，自然是十分紧张的 。对于权臣来说，懂得进退，才能获得善终的结局 。
因为长孙无忌是自己的亲舅舅，加上帮助自己登基有功，所以，李治即位后，自然是投桃报李，晋封长孙无忌为太尉兼检校中书令，知尚书、门下二省事 。众所周知，唐朝实行的是三省六部制，而长孙无忌担任的中书令，已经执掌中书省，又通过知尚书、门下二省事，以此来兼管尚书省和门下省 。基于此，三省已经被长孙无忌一人所掌握了，这无疑威胁到唐高宗的皇位了 。
唐高宗李治在位初期，长孙无忌执掌大权，以此确保唐朝皇位的顺利过渡，自然是说得过去的 。但是，在李治坐稳皇位的背景下，长孙无忌依然没有急流勇退，显然是在挑战前者的底线了，这也为之后矛盾的爆发，埋下了伏笔 。当然，唐高宗李治没有直接和长孙无忌打对台戏，而是借助“废立皇后” 这一事件，以此试探长孙无忌的反应 。
永徽五年，唐高宗欲废黜王皇后，立武昭仪为皇后 。对此，长孙无忌虽未明言反对，但却在一定程度上支持褚遂良，而褚遂良是坚决反对立武则天为皇后的 。在此基础上，唐高宗李治还是执意立武则天为皇后，并且武则天因长孙无忌接受赏赐却不肯支持自己，对他怀恨在心 。在一定程度上，长孙无忌的凄凉结局，主要是武则天出手所致 。
最后，显庆四年，许敬宗指使人向唐高宗呈奏密章，称监察御史李巢勾结长孙无忌，图谋造反 。在李治废立皇后的时候，许敬宗全力支持册封武则天为皇后，所以武则天则对许敬宗极为感激，引为心腹，迁礼部尚书 。
也即告发长孙无忌的许敬宗，是武则天的心腹，或者说此事是武则天背后指使的 。借着这件事情，唐高宗便下诏削去长孙无忌的官职和封邑，流徙黔州 。同年七月，唐高宗派人逼令长孙无忌自缢 。长孙无忌死后，家产被抄没，亲属也被流放 。
在长孙无忌被逼自杀后，唐高宗得以执掌唐朝大权，并派兵灭百济、灭高句丽，促使唐朝疆域来到了最大阶段 。当然，长孙无忌毕竟是自己的亲舅舅，自己能够登上皇位，也仰赖于他，所以，到了上元元年，唐高宗追复长孙无忌官爵，命其孙长孙元翼承袭赵国公爵位，并将他陪葬昭陵 。
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