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菌种保藏操作步骤 菌种怎么制作，菌种保藏方法

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菌种保藏操作步骤 菌种怎么制作，菌种保藏方法

文章插图
回答1、将土豆切成块 ， 放入烧杯中煮半个多小时 ， 煮好后过滤溶液备用 。2、将琼脂放入溶液中 ， 然后重新将其烧开 ， 琼脂完全溶化后继续煮一段时间 。3、煮好后将汁液分放至试管内 ， 并用高压锅消毒杀菌 ， 消毒后斜放试管 ， 待凝固后开始接种 。4、用酒精对嫩蘑菇进行杀菌 ， 并在无菌箱内将其切成小块 ， 切好后可接种至琼脂基质上 。5、堵上试管口 ， 将琼脂基质放入培养箱 ， 长满菌丝后便可形成一级菌种 。
一、菌种怎么制作
1、一级菌种
（1）向烧杯内放入切成块的土豆 ， 然后煮30多分钟 ， 煮好后过滤溶液备用 。
（2）向溶液内放入琼脂 ， 再将其烧开 ， 待琼脂完全溶化后继续煮一段时间 。
（3）煮好后 ， 将汁液分放至试管 ， 再用高压锅消毒杀菌 。消毒后将试管斜放 ， 直到冷凉凝固后即可开始接种 。
（4）用酒精对嫩蘑菇做杀菌处理 ， 然后在无菌箱内切成小块 ， 接种至琼脂基质上面 。
（5）用塞子堵上试管口 ， 再将琼脂基质放入培养箱内 ， 待长满菌丝后即可形成一级菌种 。
【菌种保藏操作步骤 菌种怎么制作，菌种保藏方法】 2、二级菌种
（1）将煮熟的大豆和谷粒置于无菌的条件下晾干 ， 再装入经过高温杀菌的玻璃瓶内 。
（2）将瓶子封口 ， 放入高压锅中 ， 经高压灭菌后放在无菌室冷凉 。
（3）将培养瓶放至无菌箱内 ， 再放入一级菌种 ， 用的小匙挖出黄豆大小的菌种接种入玻璃瓶 。
（4）接种后要封口 ， 再将玻璃瓶放到培养室中 ， 待长满菌丝后即可备用 。
3、三级菌种
（1）制备方法与二级菌种基本一致 ， 培养基可使用煮熟的麦粒、玉米粒及棉籽 。
（2）三级菌种的菌丝长满后即可取出来培育 ， 经历三级菌种的培育后可完全制成平菇菌 。
二、菌种保藏方法
1、斜面低温保藏法
将菌种接种至适宜的固体斜面培养基上 ， 待菌种充分生长后用油纸将棉塞部分包扎好 ， 然后放入冰箱 ， 温度控制在2-8℃即可 。
2、甘油管保存法
（1）将80%甘油用高压蒸汽做灭菌处理 ， 再将菌种放置在斜面培养基上培养 ， 用无菌水制成高浓度的菌悬液 。
（2）将1毫升甘油与菌液混匀 ， 使甘油的浓度达到10-30% ， 然后放在-70℃的环境中冻存 。
3、液体石蜡保藏法
（1）将液体石蜡装入三角烧瓶内 ， 塞上棉塞 ， 包扎好牛皮纸 ， 然后放在0.1MPa、121.3℃的环境中灭菌半小时 。
（2）灭菌后 ， 将烧瓶转移至40℃的温箱内蒸发水汽 。
（3）在斜面培养基内培养菌种 ， 得到健壮菌体 ， 再用灭菌吸管注入石蜡 ， 注入量以高出斜面顶端1厘米为宜 。
（4）将试管直立 ， 最后放在低温或室温环境中保存即可 。

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